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细胞培养板的选择与使用


运行平台:/WinXP软件评级:
文件大小:软件语言:简体中文
软件授权:免费软件演示地址:暂无演示
下载次数:4516 次发布时间:2009-04-28 8:41:27

软件简介:

细胞培养板作为培养细胞的一种常用和重要的工具,形状、规格、用途多样,你是否也为如何选择适合的培养板而迷茫?你是否正为如何方便、正确的使用培养板而苦恼?你对如何处理培养板是否也有困惑?对不同的培养板各有什么妙用你又有何体会?

细胞培养板的选择:

细胞培养板依底部形状的不同可分为平底和圆底(U型和V型);培养孔的孔数有6、12、24、48、96、384、1536 孔等;根据材质的不同有Terasaki板和普通细胞培养板。具体选择时根据培养细胞的类型、所需培养体积及不同的实验目的而定。

(一)平底和圆底(U型和V型)培养板的区别和选择:

贴壁细胞一般用平底培养板。

悬浮型细胞的培养一般用V型。

U型培养板亦多用于培养悬浮型细胞 。

V型培养板有时用做免疫学血凝集的实验。

不同型狀的板子自然有不同用途。平底的什麼類型的細胞都可用﹐但當細胞數目較少﹐如做克隆時﹐就用96孔平底板﹐另外﹐做MTT等實驗時﹐無論貼壁和懸浮細胞﹐一般均用平底板。至於U或V型板﹐一般在某些特殊要求時才使用。如在免疫學方面﹐當做兩種不同淋巴細胞混合培養時﹐需要二者相互接觸以刺激﹐因此﹐一般需要U型板﹐因細胞會由於重力的作用而聚集在一個很小的範圍內。V型板的用途更少﹐一般用于細胞殺傷實驗時﹐為了使效靶細胞緊密接觸﹐常使用V型板﹐但這種試驗也可用U型板替代(加入細胞後﹐低速離心)

如果是養細胞的話, 通常是選用平底的, 另外要特別注意材質, 標示"Tissue Culture (TC) Treated"就是養細胞用的。

圓底的好像沒聽說過拿來養細胞。 圓底的通常是拿來做分析, 化學反應, 或是保存樣品用的, 因為圓底比較好將液體吸得乾淨, 如果用平底的就不好吸了。 不過, 如果你是要測吸光值的話, 一定要買平底的才行。

大部分细胞培养都用平底培养板,便于镜下观测、有明确的底面积、细胞培养液面高度相对一致,还便于MTT检测。

圆底培养板主要用于同位素掺入的实验,需要用细胞收集仪收集细胞的培养,如“混合淋巴细胞培养”等。

(二)问题集锦

问:培养板有4、6、12、24、48、96孔几种规格 ,但不知道到底什么实验用哪种规格?

答:要根据你具体的实验要求,流式一般用6孔,MTT一般用96孔,细胞爬片一般用24孔等!要具体根据你实验来定!

问:Terasaki板是什么培养板,与普通细胞培养板有什么区别?

答:Terasaki plate主要是用于晶体学研究,产品设计便于对晶体的观察与结构分析。有两种sitting 和handing drop两种方法,两种方法应用产品的外形结构也不同。材料上选择crystal class polymer ,特殊的材料有利观察晶体结构。

细胞培养板主要是PS材料。材料是treated sufface。便于细胞贴壁生长与伸展。当然还有浮游细胞的生长材料,同时还有low binding surface,有关更多实验材料上的应用与对材料的选择。

问:测吸光度用酶标仪用多孔细胞培养板可以么? 酶标板与多孔细胞培养板有什么区别?

答:用多空细胞培养板测吸光度肯定可以拉,我们经常用它来做样品的蛋白定量和MTT检测。

区别:酶标板一般要比细胞培养板贵,细胞板主要做细胞培养,但也可以用来测蛋白浓度;酶标板包括包被板和反应板,一般不能用做细胞培养,它主要做免疫酶联反应后的蛋白检测,它需要更高的要求还需要特定的酶标工作液。如下是个用酶标板检测冠状病毒IgM/IgG抗体例子:

【操作步骤】

1.加样品:将标本稀释液100ul(或2滴)加到包被板内(预留阴阳性及空白对照2-5孔),将待检血清用PBS或生理盐水按1:20稀释后取10ul加入反应孔内。

2.加对照:加入阴性对照1-3孔,阳性对照1孔,各100ul对照血清。空白对照1孔空置。

3.温育:将反应板震荡使样品混匀后,置37℃温箱或水浴反应20分钟。

4.洗板:用蒸馏水将浓缩洗涤液15ml稀释至300ml。

(1)手洗:将反应板孔内容物倾出,将洗涤液注满反应孔,放置30秒钟后用力甩去,如此重复5次后拍干。

(2)机洗:5次,每孔注入洗涤液200ul或注满,停留30秒钟后吸尽拍干。

5.加酶标工作液:每孔加入100ul(或2滴)酶标工作液,置37℃温箱反应20分钟后,洗板5次,洗板操作同步骤4。

6.显色和终止反应:将底物A、B液各50ul(或1滴)加到反应孔内,37℃避光显色10分钟。每孔加入终止液50ul(或1滴)混匀终止反应。

【结果判定】

1.酶标仪设定波长450nm,先用空白调零,然后测定各孔OD值;如果选用双波长测定,不必设置空白对照孔。

2.当阴性对照平均OD值小于0.08,阳性对照(pc)OD值大于0。30时,说明试剂盒有效且实验操作正确,否则应当重复试验。

3.临界值(CUT—OFF VALUE)=0.15+阴性对照平均(NC)OD值(当阴性平均OD值小于0.05时,按0.05计算;当阴性平均OD值大于或等于等于0.05时按实际值计算)。

4.标本OD值≤临界值为阴性,标本OD值>临界值为阳性。

常用不同培养板的孔底面积及推荐加液量:不同孔板所加培养液的液面都不宜太深,一般在2-3mm范围,结合不同孔的底面积就可算出各培养孔的适宜加液量。若加液量过多会影响气体(氧气)交换,而且在搬动过程中易溢出造成污染。具体所加细胞密度依实验的目的不同灵活掌握。

培养器皿          面积(cm2) 培养液量(ml)          细胞量

96 孔培养板             0.32          0.1                     10e5

24孔培养板               2            1.0                    5×10e5

12孔培养板              4.5           2.0                      10e6

6孔培养板               9.6           2.5                    2.5×10e6

3.5 cm 培养皿            8            3.0                    2×10e6

6 cm 培养皿             21            5.0                    5.2×10e6

10 cm 培养皿            55           10.0                   13.7×10e6

25cm2 培养瓶            25            5.0                     5×10e6

75cm2 培养瓶            75            15~30                  2×10e7


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